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細胞學堂 | C2C12細胞培養(yǎng)攻略,C2C12細胞誘導分化步驟

來源:Pricella  瀏覽量:  發(fā)布時間:2022-06-20 13:59:35


C2C12 (小鼠成肌細胞)是由D·Yaffe和O·Saxel建立的小鼠成肌細胞株的亞克隆。C2C12細胞分化很快,容易形成可伸縮的肌管并生成特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白2(BMP-2)處理C2C12細胞,會導致C2C12細胞的分化途徑從成肌細胞轉換為成骨細胞。

C2C12作為研究肌肉理想的細胞模型,在實驗研究中常誘導其分化為多核肌管。成肌分化在肌肉再生中起重要作用,它是通過一種高度協(xié)調(diào)的序列程序來產(chǎn)生成熟的骨骼肌的過程。


基礎信息

生長特性:貼壁細胞

細胞形態(tài):成肌細胞樣

生長培養(yǎng)基DMEM10% FBS1% P/S

推薦傳代比例:1:3-1:4

推薦換液頻率:2~3次/周

倍增時間:~20小時

凍存條件:   

凍存液:55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮

培養(yǎng)條件:   

氣相:空氣,95%;CO2,5%

溫度:37℃

C2C12細胞正常生長

圖1. C2C12細胞正常生長



C2C12細胞狀態(tài)直接影響著分化潛力,要想細胞分化做得好,首先要在培養(yǎng)上下功夫。該細胞的換液和傳代步驟,參照其他貼壁細胞進行操作即可。除此之外,還有以下三點,需要留意:

1

該細胞生長速度快,容易分化,建議密度達70%時傳代;

2

不要讓細胞長得太滿甚至開始融合,影響后續(xù)成肌分化率;

3

細胞消化完全后再吹打混勻,不要用槍頭把沒有消化好的細胞吹下來,以免細胞成團。


待C2C12細胞生長至匯合度為80%左右時,即可進行誘導分化。具體步驟如下:


01

丟棄舊培養(yǎng)基,用PBS清洗兩次;

02

換分化培養(yǎng)基(高糖DMEM+2%~6%馬血清+1% P/S)誘導,然后置于CO2恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng);

備注:由于馬血清品質(zhì)不同,建議馬血清做2%、4%、6%梯度測試,以確定最佳濃度。

03

每24h換液一次,在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長狀況。誘導分化成功時,可以看見肌管表現(xiàn)為厚的管狀結構,有時為多核。

C2C12細胞分化

圖2. C2C12細胞分化



小貼士

C2C12細胞代數(shù)不要太高;

 若加入分化培養(yǎng)基后,細胞仍然繼續(xù)生長,可用吉姆薩染色驗證是否有分化了的肌纖維;

■ C2C12細胞成肌分化過程中會有少量細胞凋亡,屬于正常現(xiàn)象。


參考文獻

[1]張琳. EPA和DHA對C2C12成肌細胞增殖,分化和凋亡的影響[D]. 武漢輕工大學, 2018.


注:部分圖片來源于網(wǎng)絡

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