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細胞學堂 | C2C12細胞培養(yǎng)攻略,C2C12細胞誘導分化步驟
來源：Pricella 瀏覽量： 發(fā)布時間：2022-06-20 13:59:35
C2C12 (小鼠成肌細胞)是由D·Yaffe和O·Saxel建立的小鼠成肌細胞株的亞克隆。C2C12細胞分化很快，容易形成可伸縮的肌管并生成特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白2(BMP-2)處理C2C12細胞，會導致C2C12細胞的分化途徑從成肌細胞轉換為成骨細胞。
C2C12作為研究肌肉理想的細胞模型，在實驗研究中常誘導其分化為多核肌管。成肌分化在肌肉再生中起重要作用，它是通過一種高度協(xié)調(diào)的序列程序來產(chǎn)生成熟的骨骼肌的過程。
基礎信息
C2C12細胞狀態(tài)直接影響著分化潛力，要想細胞分化做得好，首先要在培養(yǎng)上下功夫。該細胞的換液和傳代步驟，參照其他貼壁細胞進行操作即可。除此之外，還有以下三點，需要留意：
1
該細胞生長速度快，容易分化，建議密度達70%時傳代；
2
不要讓細胞長得太滿甚至開始融合，影響后續(xù)成肌分化率；
3
細胞消化完全后再吹打混勻，不要用槍頭把沒有消化好的細胞吹下來，以免細胞成團。
待C2C12細胞生長至匯合度為80%左右時，即可進行誘導分化。具體步驟如下:
01
丟棄舊培養(yǎng)基，用PBS清洗兩次；
02
換分化培養(yǎng)基（高糖DMEM+2%~6%馬血清+1% P/S）誘導，然后置于CO2恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；
備注：由于馬血清品質(zhì)不同，建議馬血清做2%、4%、6%梯度測試，以確定最佳濃度。
03
每24h換液一次，在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長狀況。誘導分化成功時，可以看見肌管表現(xiàn)為厚的管狀結構，有時為多核。
圖2. C2C12細胞分化
參考文獻
注：部分圖片來源于網(wǎng)絡
