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細(xì)胞學(xué)堂 | 不貼壁、容易漂？TM3、TM4細(xì)胞培養(yǎng)訣竅盤點(diǎn)
來源：Pricella 瀏覽量： 發(fā)布時(shí)間：2022-06-14 11:01:08
TM3、TM4來源于小鼠睪丸組織，其培養(yǎng)條件基本相同，細(xì)胞特性卻有所不同。
TM3 (小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞) 在LH作用下cAMP產(chǎn)量升高，但對促卵泡激素沒有響應(yīng)；在LH存在下，TM3細(xì)胞可以代謝膽固醇。TM3細(xì)胞對LH的響應(yīng)持續(xù)時(shí)間與血清批次有關(guān)。
TM4 (正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞) 在FSH的作用下cAMP產(chǎn)量增加，但對LH無反應(yīng)；TM4細(xì)胞與原代Sertoli細(xì)胞相比，對FSH的反應(yīng)性降低。TM4細(xì)胞組成性纖溶酶原激活物的產(chǎn)量很低，但可被FSH刺激產(chǎn)生，受維甲酸刺激可有大幅增高。TM4細(xì)胞可產(chǎn)生視黃醇結(jié)合蛋白、組織纖溶酶原激活物和轉(zhuǎn)鐵蛋白；TM4細(xì)胞表達(dá)FSH受體、雄激素受體和孕激素受體；鼠痘病毒陰性。
基礎(chǔ)信息
生長特性：貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
生長培養(yǎng)基：DMEM/F12＋5% HS(164215)＋2.5% FBS＋1% P/S
推薦傳代比例：1:3-1:4
推薦換液頻率：2~3次/周
凍存條件：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
培養(yǎng)條件：
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
圖1. TM3正常生長圖片
圖2. TM4正常生長圖片
TM3、TM4細(xì)胞貼壁松散，再加上運(yùn)輸刺激，到貨時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞脫壁漂浮的現(xiàn)象。遇到這種情況應(yīng)該怎么辦呢？
如果TM3、TM4到貨時(shí)發(fā)現(xiàn)有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán)，不要著急，按照以下步驟進(jìn)行處理后，細(xì)胞即可正常生長：
將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細(xì)胞（1200rpm 3min）；
去掉上清，用PBS重懸細(xì)胞，將細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中，PBS震動(dòng)離心管混勻即可，再次離心（1200rpm 3min）；
去掉上清，加入1mL左右0.25%胰酶重懸混勻細(xì)胞，震動(dòng)離心管混勻即可，不能吹打，放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞；
消化2-3min后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散。加入5mL含血清的培養(yǎng)基混勻后終止消化，離心（1200rpm 3min）；
去掉上清，加入5mL左右的專用完全培養(yǎng)基混勻，接種于無菌容器中。
將細(xì)胞按照以上步驟處理后，第二天基本上都會(huì)重新貼壁。
完美解決細(xì)胞收貨問題，只是養(yǎng)好TM3、TM4細(xì)胞的其中一個(gè)環(huán)節(jié)。在培養(yǎng)細(xì)胞過程中，還有許多細(xì)節(jié)，是需要重視的。
● 培養(yǎng)過程中，動(dòng)作一定要輕柔;
●消化1~2min后，在顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯分離變圓，即可終止，全程不要拍打培養(yǎng)瓶；
●TM3、TM4細(xì)胞生長快速，貼壁松散，細(xì)胞長滿后會(huì)成片飄起，注意及時(shí)傳代；
● 傳代第二天可能會(huì)有聚團(tuán)現(xiàn)象，第三天可自行展開；
● 傳代密度不可過高，至少預(yù)留2天的生長時(shí)間；
● 換液時(shí)需預(yù)熱培養(yǎng)基。
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