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細(xì)胞學(xué)堂 | 不貼壁、容易漂?TM3、TM4細(xì)胞培養(yǎng)訣竅盤點(diǎn)

來源:Pricella  瀏覽量:  發(fā)布時(shí)間:2022-06-14 11:01:08

TM3、TM4來源于小鼠睪丸組織,其培養(yǎng)條件基本相同,細(xì)胞特性卻有所不同。

TM3 (小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞) 在LH作用下cAMP產(chǎn)量升高,但對促卵泡激素沒有響應(yīng);在LH存在下,TM3細(xì)胞可以代謝膽固醇。TM3細(xì)胞對LH的響應(yīng)持續(xù)時(shí)間與血清批次有關(guān)。

TM4 (正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞) 在FSH的作用下cAMP產(chǎn)量增加,但對LH無反應(yīng);TM4細(xì)胞與原代Sertoli細(xì)胞相比,對FSH的反應(yīng)性降低。TM4細(xì)胞組成性纖溶酶原激活物的產(chǎn)量很低,但可被FSH刺激產(chǎn)生,受維甲酸刺激可有大幅增高。TM4細(xì)胞可產(chǎn)生視黃醇結(jié)合蛋白、組織纖溶酶原激活物和轉(zhuǎn)鐵蛋白;TM4細(xì)胞表達(dá)FSH受體、雄激素受體和孕激素受體;鼠痘病毒陰性。



基礎(chǔ)信息

生長特性:貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣

生長培養(yǎng)基:DMEM/F125% HS(164215)2.5% FBS1% P/S

推薦傳代比例:1:3-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

凍存條件:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

培養(yǎng)條件:

氣相:空氣,95%;CO2,5%

溫度:37℃


TM3細(xì)胞正常生長圖片

圖1. TM3正常生長圖片


 TM4細(xì)胞正常生長圖片

圖2. TM4正常生長圖片

TM3、TM4細(xì)胞貼壁松散,再加上運(yùn)輸刺激,到貨時(shí),可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞脫壁漂浮的現(xiàn)象。遇到這種情況應(yīng)該怎么辦呢?

如果TM3、TM4到貨時(shí)發(fā)現(xiàn)有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán),不要著急,按照以下步驟進(jìn)行處理后,細(xì)胞即可正常生長:

1

將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管,離心收集細(xì)胞(1200rpm 3min);

2

去掉上清,用PBS重懸細(xì)胞,將細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中,PBS震動(dòng)離心管混勻即可,再次離心(1200rpm 3min);

3

去掉上清,加入1mL左右0.25%胰酶重懸混勻細(xì)胞,震動(dòng)離心管混勻即可,不能吹打,放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞;

4

消化2-3min后,用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞團(tuán)分散。加入5mL含血清的培養(yǎng)基混勻后終止消化,離心(1200rpm 3min);

5

去掉上清,加入5mL左右的專用完全培養(yǎng)基混勻,接種于無菌容器中。


小貼士:

這時(shí)候,可在顯微鏡下觀察TM3、TM4細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞,若還有 3-5 個(gè)成團(tuán)的小細(xì)胞團(tuán),可不用重新消化,使之貼壁且生長穩(wěn)定后再消散細(xì)胞。


將細(xì)胞按照以上步驟處理后,第二天基本上都會(huì)重新貼壁。

完美解決細(xì)胞收貨問題,只是養(yǎng)好TM3、TM4細(xì)胞的其中一個(gè)環(huán)節(jié)。在培養(yǎng)細(xì)胞過程中,還有許多細(xì)節(jié),是需要重視的。




● 培養(yǎng)過程中,動(dòng)作一定要輕柔;

消化1~2min后,在顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯分離變圓,即可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;

TM3、TM4細(xì)胞生長快速,貼壁松散,細(xì)胞長滿后會(huì)成片飄起,注意及時(shí)傳代;

傳代第二天可能會(huì)有聚團(tuán)現(xiàn)象,第三天可自行展開;

傳代密度不可過高,至少預(yù)留2天的生長時(shí)間;

換液時(shí)需預(yù)熱培養(yǎng)基。





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