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細(xì)胞學(xué)堂 | 人軟骨細(xì)胞傳代后變形原因揭秘
來源:Pricella 瀏覽量: 發(fā)布時間:2022-06-08 09:15:16
軟骨組織由軟骨細(xì)胞、基質(zhì)及纖維構(gòu)成,人軟骨細(xì)胞就分離自軟骨組織。軟骨細(xì)胞位于軟骨陷窩內(nèi)。
電鏡下,軟骨細(xì)胞有突起和皺褶,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中,軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形,在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。
體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞,對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具有重要意義。
基礎(chǔ)信息
培養(yǎng)基:含F(xiàn)BS、生長添加劑、雙抗等
換液頻率:每2~3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):梭形、多角形
傳代特性:可傳5代左右,3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
軟骨細(xì)胞傳代后變形,可能是大多數(shù)老師在培養(yǎng)過程中都會遇到的問題。不過,傳代時形態(tài)發(fā)生變化,這是正常現(xiàn)象。下面詳解該細(xì)胞形態(tài)的變化過程:
第1代的細(xì)胞形態(tài)
第1代人軟骨細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈梭形、多角形(如圖1)。
圖1. 第1代人軟骨細(xì)胞狀態(tài)圖(圖片來源于客戶,僅供參考)
第2代的細(xì)胞形態(tài)
傳了1代后,細(xì)胞形態(tài)開始發(fā)生改變,細(xì)胞伸出絲狀偽足,形態(tài)似成纖維細(xì)胞(如圖2)。
圖2. 第2代人軟骨細(xì)胞狀態(tài)圖(圖片來源于客戶,僅供參考)
從第1代到第2代,細(xì)胞就發(fā)生了形態(tài)上的改變。那么,繼續(xù)傳代下去,細(xì)胞形態(tài)是否會繼續(xù)發(fā)生改變呢?
答案是肯定的。第3代的軟骨細(xì)胞形態(tài)成纖維化會更為明顯,細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)長梭形,并且生長速度開始下降。4代后較為明顯,到第6代細(xì)胞形態(tài)幾乎全部變?yōu)殚L梭形,似成纖維細(xì)胞樣。所以,建議最好選擇2代或3代的軟骨細(xì)胞進(jìn)行實驗。
既然人軟骨細(xì)胞傳代時,形態(tài)會發(fā)生變化,那究竟是什么原因造成的呢?
在體外培養(yǎng)人軟骨細(xì)胞時,軟骨細(xì)胞呈貼壁生長,原代細(xì)胞大多呈橢圓形和多角形。隨著傳代次數(shù)增加,細(xì)胞逐漸變成長梭形,向纖維樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化。同時,該細(xì)胞的功能也會發(fā)生變化:軟骨標(biāo)志性蛋白Ⅱ膠原合成分泌減少,而Ⅰ、Ⅲ型膠原合成分泌增多。
Ⅱ膠原的合成和分泌,是軟骨細(xì)胞維持其分化表型的特征性指標(biāo),其在透明軟骨中占膠原的85%~90%,提供了軟骨特有的張力和硬度。
其次,軟骨中的其他分子與膠原蛋白結(jié)合,會形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),使軟骨具有一定的彈性,同時對于維持軟骨形狀,承載外來負(fù)荷起著非常重要的作用。所以,隨著傳代次數(shù)的增加,維持細(xì)胞形態(tài)的物質(zhì)會逐漸減少,細(xì)胞的形態(tài)就會發(fā)生改變。
這種形態(tài)和功能的變化稱之為反分化現(xiàn)象,也是單層傳代細(xì)胞的普遍現(xiàn)象。
培養(yǎng)小貼士:
1. 低密度培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞易發(fā)生去分化現(xiàn)象,一般最適接種密度為2~10×104/cm2;
2. 軟骨細(xì)胞代謝較為緩慢,換液頻度的增加無益于細(xì)胞的增殖,反而可能破壞由細(xì)胞分泌而形成的群體化學(xué)環(huán)境。
●參考文獻(xiàn)●
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