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細(xì)胞學(xué)堂 | H22(小鼠肝癌細(xì)胞)腹水傳代怎么做?H22細(xì)胞培養(yǎng)注意事項

來源:Pricella  瀏覽量:  發(fā)布時間:2022-05-31 09:18:20

H22(小鼠肝癌細(xì)胞)分離自小鼠腹水,由大連醫(yī)科學(xué)院建立。在實驗研究中,常將H22細(xì)胞接種于小鼠皮下,建立異位移植模型,廣泛用于抗腫瘤藥物藥效學(xué)初步篩選。



H22細(xì)胞基礎(chǔ)信息

生長特性:

      懸浮細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài):

      淋巴母細(xì)胞樣

生長培養(yǎng)基:

      RPMI-164010% FBS1% P/S

推薦傳代比例:

      3×10^5-5×10^5cells/mL

推薦換液頻率:

      2~3次/周

凍存液:

      55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

培養(yǎng)條件:

     氣相:空氣,95%;CO2,5%

     溫度:37℃



腹水傳代培養(yǎng)

了解完H22細(xì)胞的基礎(chǔ)信息,我們就可以著手準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)了。普諾賽已經(jīng)為大家總結(jié)好了詳細(xì)的腹水傳代步驟,希望能對大家有所幫助!


1


H22體外培養(yǎng)至合適密度后,離心(1200r/min,3min)收集細(xì)胞,用PBS重懸備用;

2

取0.2mL培養(yǎng)好的細(xì)胞計數(shù)(細(xì)胞密度為1*10^7/mL)后,腹腔注射至小鼠腹腔;

3

飼養(yǎng)5-6天,小鼠腹水可收集(4-8mL);

4

采用無菌抽取或解剖收集腹水后,用PBS稀釋2倍后離心(1200r/min,3min),去上清,重復(fù)洗滌過程1-2次,加入10mLPBS重懸制備成細(xì)胞懸液備用;

5

取50mL離心管加入10mL小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液,上層加入10mL細(xì)胞懸液,離心收集沉淀(2000r/min,10min),重復(fù)2-3次;

6

將收集的沉淀用1640培養(yǎng)基重懸,接種于T175培養(yǎng)瓶中,接種密度為4*10^5 /mL,放置培養(yǎng)箱培養(yǎng)8-12h;

7

收集細(xì)胞懸液離心(1200r/min,3min),用程序凍存液將細(xì)胞凍存,凍存密度為10^7/mL




注意事項

掌握以上培養(yǎng)步驟就一定可以培養(yǎng)好細(xì)胞嗎?你還需要掌握以下這些注意事項 :

1

新手可以選擇處死小鼠,然后先用注射器吸出一些細(xì)胞,再剪開腹腔,用槍吸出剩下的;熟練了可以不處死小鼠,直接注射器插進(jìn)去吸,小鼠還能重復(fù)接種;

2

注意不要戳破內(nèi)臟,否則容易造成細(xì)胞交叉污染;

3

小鼠飼養(yǎng)時間控制在5天為佳。時間過長,小鼠會死亡或收集的腹水中紅細(xì)胞含量過高;

4

復(fù)蘇之后會有死細(xì)胞,但不影響正常腹水的產(chǎn)生;

5

H22細(xì)胞體外培養(yǎng)增殖幾代就需要腹水培養(yǎng)一次,否則細(xì)胞狀態(tài)會急速變差,碎片增多。做實驗需提前擴(kuò)增至所需的細(xì)胞量然后凍存起來,長期培養(yǎng)需5代內(nèi)腹水培養(yǎng)一次;

6

中間每一次傳代可以先離心,PBS或生理鹽水重懸后打給下一只;

7

收集腹水紅細(xì)胞過多時,可以用紅細(xì)胞裂解液去除;

8

用分離液分離細(xì)胞時,可多次分離篩選,保證細(xì)胞的純度;

9

凍存細(xì)胞最好分離出來后培養(yǎng)8個小時左右再凍存,可以有效去除可能沒有篩出去的血紅細(xì)胞,還可以讓細(xì)胞的狀態(tài)調(diào)整至最佳;

10

細(xì)胞活力不一樣、接種細(xì)胞量不一樣,腹水長出的時間就不一樣。接種是否成功可以通過觀察老鼠的狀態(tài)來確定,接了腹水的老鼠活動力會變?nèi)酢?/p>



常見問題及解答


關(guān)于H22細(xì)胞腹水傳代,普諾賽將大家疑問較多的問題,總結(jié)如下。

01

 H22腹水傳代可以用哪些小鼠?

可以用balb/c小鼠、Km小鼠等,體重在20g左右。

02

H22細(xì)胞收貨有哪些注意事項?

到貨后,請將細(xì)胞瓶豎立著靜置2~4h,然后把瓶中培養(yǎng)基上面部分培養(yǎng)基小心吸出,留底部細(xì)胞和3mL左右培養(yǎng)基在原瓶。吸出的細(xì)胞離心收集細(xì)胞沉淀,離心轉(zhuǎn)速1200轉(zhuǎn)3分鐘。

03

為什么剛到貨的H22細(xì)胞會出現(xiàn)細(xì)胞聚團(tuán)?

懸浮細(xì)胞發(fā)貨時密度不能太低,因路上運(yùn)輸,狀態(tài)不穩(wěn)定,剛到貨時可能會出現(xiàn)聚團(tuán)的情況。待穩(wěn)定培養(yǎng)幾天,聚團(tuán)會消失,需要注意培養(yǎng)時少動細(xì)胞,以免損傷細(xì)胞。

溫馨提醒:

如果您想要了解或選購細(xì)胞系或者原代細(xì)胞,請點(diǎn)擊我要選購,有任何疑問也可以點(diǎn)擊右方的在線咨詢,專業(yè)技術(shù)人員將為您提供解答。


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