技術(shù)支持Technical Support
聯(lián)系我們CONTACT US
400-999-210024小時服務熱線
細胞學堂 | 原代細胞和RAW 264.7誘導破骨細胞攻略！
來源：Pricella 瀏覽量： 發(fā)布時間：2022-07-12 14:12:16
骨骼系統(tǒng)為支撐身體、協(xié)調(diào)軀體運動、控制礦物質(zhì)穩(wěn)態(tài)和造血提供了重要的基礎(chǔ)。破骨細胞是由單核/巨噬細胞造血譜系前體細胞融合而成的特化細胞，在骨穩(wěn)態(tài)和健康維持中至關(guān)重要。已有大量實驗證實其細胞形成和功能失調(diào)與骨質(zhì)疏松癥、骨折愈合、骨關(guān)節(jié)炎和原發(fā)性/轉(zhuǎn)移性骨腫瘤等密切相關(guān)。一直以來，破骨細胞作為“噬骨者（bone eaters）”，被聚焦于探討其在骨穩(wěn)態(tài)和疾病中的角色。
破骨細胞為終末分化細胞，不能傳代，光鏡下可觀察到破骨細胞胞體較大、多核、有偽足和突起等特征。
圖1. 破骨細胞形態(tài)
在實驗研究中，常通過誘導劑的誘導作用使體外培養(yǎng)的干細胞或單核細胞向破骨細胞分化，從而獲得破骨細胞。此方法獲得的是破骨樣細胞，破骨樣細胞是指原代或經(jīng)誘導而來具有破骨細胞特性的細胞，近年來廣泛用于破骨細胞的研究。誘導法可獲得的細胞純度高、數(shù)量大，可滿足各種生化和分生實驗。常見的破骨誘導方法有2種：
目前發(fā)現(xiàn)的可誘導分化為破骨細胞的細胞系常見的是小鼠RAW 264. 7細胞系，下面我們以這個細胞為例介紹一下它的誘導方法。
抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色
TRAP主要反映了破骨細胞的活性及骨吸收能力，是破骨細胞的良好標志物,也是最常用的鑒定方法。待誘導出破骨細胞，可根據(jù)以下步驟進行鑒定。
TRAP染色步驟: 2.5%戊二醛固定細胞10 min，蒸餾水充分沖洗，用TRAP染液處理50 min，蒸餾水充分沖洗后甘油封片。陽性染色細胞呈紅色，定位于胞漿, 陰性染色細胞呈黃色。
圖3. 破骨細胞經(jīng)TRAP染色
注意事項
原代細胞誘導形成的成熟破骨細胞數(shù)量及純度有限，但骨吸收活性強；RAW264.7細胞系誘導產(chǎn)生的破骨細胞數(shù)量多純度高，但吸收活性弱；
如果培養(yǎng)時，鏡下較多細胞出現(xiàn)偽足時，細胞整體狀態(tài)可能不好，這時的細胞不適合用于誘導破骨；
RAW264.7細胞的傳代次數(shù)對其能否誘導成破骨細胞至關(guān)重要，代數(shù)越低，細胞的分化能力越高；
原代細胞誘導培養(yǎng)形成的破骨細胞周期長，一般在9-10天時才達到最佳狀態(tài)；RAW 264.7誘導培養(yǎng)的周期稍短，一般在第5~6天時出現(xiàn)大量破骨細胞；
除了TRAP染色鑒定破骨細胞，通過觀察細胞核的數(shù)量以及降鈣素受體染色和觀察骨（牙）片吸收陷窩，可以進一步鑒定破骨細胞是否具有骨吸收能力。
●參考文獻●
